华南野生蔬菜守宫木的毒理学研究郭巨先，杨暹，郭兰良(华南农业大学园艺学院，广东广州)摘要：试验以华南主要野生蔬菜守宫木为材料，对其毒理学进行了探讨．结果表明：小鼠经VI服LD，。大于10．00 g·kg～；守宫木引起小白鼠的精子畸形率增多；守宫木30 d喂养对sD大Et鼠的肝、肾、脾、心、肺、睾丸等器官有损伤，且组问差异显著，呈一定的剂量反映关系，试验表明30 d喂养守宫木最大无作用剂量组应小于2．5 g·kg～．说明守宫木可能具有蓄积毒性，不适宜作为蔬菜长期日常食用．关键词：华南；野生蔬菜；守宫木；毒理学中图分类号：$647文献标识码：A文章编号：1001-411X(2005)04-0010—05Studies on the toxicology ofSauropus androgynus， a wild vegetable inSouthChinaGUOJu—xian，YANGXian，GUOLan—liang(College ofHorticulture，SouthChinaXgio．Univ．，Guangzhou，China)Abstract：The toxicity ofSauropus androgynus，a wild vegetable inSouthChina，was investigated in this study．It was shown that theLD50 for mice was higher than10．00 g‘kg—and an increase of sperm ab— normality was observed in mice．The30 d feeding test showed thatS．androgynus could damage liver， kidney，spleen，heart，lung and testis of the mice．The damage became severer with the increase of dose．In30 d feeding withS．androgynus，the maximal inactive dose group was less than2．5 g·kg～， indicating that it is possible thatS．androgynus has an accumulative toxicity，and is not suitable for hu— man and animal consumption．Key words：SouthChina；wild vegetable；Sauropus androgynus；toxicology野生蔬菜由于具有独特的风味而深受人们的欢迎，然而有关野菜的食品毒理学安全性评价方面的研究报道尚少．但有关守宫木可能存在毒性的相关报道较多，如台湾连续发生因为食用守宫木而引起中毒事件¨。3J，但都没有进行系统的试验，缺少科学依据．针对人们对野菜食用安全性的模糊认识，本研究按照中华人民共和国国家标准《食品安全性毒理学评价程序和方法》对食品新资源和新资源食品的规定(GBl5193—94)H1，并参照卫生部规划教材《卫生毒理学基础》的方法。5J，对守宫木进行了急性毒性试验、小鼠精子畸形试验和SD大白鼠30 d喂养毒性试验，并对其食用安全性进行探讨，为守宫木是否可作为蔬菜食用提供科学依据．1材料与方法1．1材料1．1．1受试材料守宫木Sauropus androgynusL。Merr．，别名天绿香、树仔菜、树菜、越南菜、泰国枸杞菜等，采自华南农业大学蔬菜基地野生蔬菜资源圃．于植株的旺盛生长期采集地上可食部分，将样品洗净晾干后，放入70℃通风式烘箱中干燥至恒质量，粉碎后过100目筛，放置干燥器中备用．1．1．2受试动物受试用动物昆明小白鼠和离乳SD大白鼠为普通级，均由广东省医学实验动物中心收稿日期：2005—05—17作者简介：郭巨先(1970一)，女，硕士，现在广东省农业科学院蔬菜研究所工作．通讯作者：杨暹(1964一)，男，教授，E·mail：yxl6@tom．COIII．基金项目：广东省自然科学基金资助项目()第4期郭巨先等：华南野生蔬菜守宫木的毒理学研究提供．试验前观察1周，健康状况良好．1．2方法1．2．1经口急性毒性试验取干样用蒸馏水调成混悬液．按Horn’S法(剂量递增法)，设0(蒸馏水对照)、1．00、2．15、4．64、10．00 g·kg一4种剂量．受试动物随机分组，每组10只昆明小白鼠，雌雄各半．体质量18～22 g．试验小鼠接触受试物方式为经口灌胃，灌胃量为0．02 mL·g～．受试前6 h禁食不禁水，连续观察7 d．1．2．2精子畸形试验取干样用蒸馏水调成混悬液．设2．5、5．0 g-kg。12种剂量，另设阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(环磷酰胺0．04 g·kg一)，共4个组．试验动物均选用雄性昆明小白鼠，体质量26～30 g．小鼠接触受试物方式为经口灌胃，灌胃量为0．02 mL·g～，连续给样5 d．于首次给予受试物后的第35 d，颈椎脱臼法处死小鼠．参照文献[5]的方法取精子，并计算精子畸形率．1．2．330 d喂养SD大白鼠毒性试验将受试物拌人饲料，按饲料中受试物的含量(埘)设低、中、高剂量组，分别为2．5、5．0、10．0 g·kg～，另设对照空白组共4个组，喂养大鼠30 d，对照组喂基础饲料，受试动物均以自来水作饮用水．试验动物随机分组，每组20只sD大白鼠，雌雄各半，体质量80 g左右．临床检查：每天观察并记录动物的一般表现行为、中毒症状和死亡情况．每6 d称1次体质量并统计饲料摄入量，计算平均摄食量、增质量及饲料利用率．血液学指标的测定：参照文献[6，7]的方法，对试验大鼠进行了血液学指标测定．30 d喂养试验结束时，从SD大白鼠的眼睛取血约2 mL，加EDTA—K2抗凝剂，采用瑞典产的AC920EO型血球计数仪立即检测血液学指标，包括：红细胞计数(RBC)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞压积(MCV)、红细胞体积分布宽度(RDW)、血红蛋白量(HGB)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、白细胞计数(WBC)，以及白细胞3项分类中的淋巴细胞(LYM)、中间细胞(MID)、粒细胞(GRA)．血液生化学指标的测定：参照文献[8]的方法，对试验大鼠进行了血液学指标测定．30 d喂养试验结束时，从SD大白鼠的眼睛采血约2 mL，加肝素抗凝剂，通过离心分离血浆．取血浆约0．8 mL，采用日本产的H立7020型血液自动生化分析仪进行检测，测定了谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、血糖(GLU)等指标．器官系数计算与病理组织学检查：于试验结束后，断头处死各组的全部大鼠，对各组动物进行肉眼病理学检查，取主要器官(肝、肾、脾、心、肺、睾丸)，分别称质量，计算器官系数(脏体比)．器官系数=(某个器官的湿质量／体质量)×100％．同时取器官肝、肾、脾、心、肺、睾丸、小肠等用体积分数为100A，的甲醛溶液将组织固定，石蜡包埋切片，H．E染色进行病理组织学检查．2结果与分析2．1小鼠急性毒性试验在7 d的观察期内，野菜守宫木的各供试组小白鼠均未出现明显中毒症状和不良反应，也未见动物死亡，小鼠经口服LD；。大于10．00 g-kg～．2．2守宫木对小鼠精子畸形率的影响守宫木的精子畸形检出率见表1．经统计分析，阳性对照组与阴性对照组比较，精子畸形率显著增高．守宫木的5．0 g·kg。1剂量组的精子畸形率达到8．50％，比阴性对照组(2．10％)显著增高，试验结果为阳性．表1守宫木对小鼠精子畸形率的影响Tab．1Effect ofSauropus androgynusOR abnormal rate of sperms in mice2．330 d喂养毒性试验2．3．1一般症状表现本次试验中对照组和低剂量组受试动物一般活动基本正常，中、高剂量组自第5 d起受试动物开始出现中毒表现，以后继续消瘦．高剂量组从第10 d开始出现死亡，至试验结束，只剩下1只雄性sD大白鼠，体质量仅47 g．中毒症状表12华南农业大学学报第26卷现为精神沉郁、运动失调、打堆伏卧、呼吸急促、全身震颤、极度消瘦、反应迟钝．解剖后肉眼观察心、肝、肾、脾和肺未见明显异常，但胃壁增生、发红，胃肠充气明显，呈透明．高、中、低剂量组之间差异显著．2．3．2体质量、饲料利用率大鼠的体质量增长情况见图1，饲料利用率见表2．高剂量组的大白鼠至试验结束陆续死亡，所以未能得出饲料利用率．30 d喂养期间，各剂量组的大鼠在同时期同性别的体质量及体质量增长率、饲料利用率均显著低于对照，说明守官木对sD大白鼠生长有明显的抑制作用，对饲料利用率有显著的降低作用．┏━━━┳━━┓┃影┃名┃┃彩．┃┃┗━━━┻━━┛，(喂养teeding)／d a雄性male612 l删艮养feeding)／d b雌性female图1守宫木30 d喂养对雌雄SD大自鼠体质量变化的影响Fig．1Effect of30 d feeding withSauropus androgynus on body mass of male and femaleSD white rat表2守宫木30 d喂养对SD大白鼠的饲料利用率的影响1’Tab．2Effect of30 d feeding withSauropus androgynus on feed efficiency ofSD white rat1)试验动物数均为10只；高剂量处理的雌雄大白鼠全邵死亡，故没有饲料利用率指标2．3．330 d喂养对SD大白鼠血液学指标和血液生化指标的影响血液学检查结果见表3．雌性大白鼠的RBC以中剂量组最高，与对照差异显著；MCH以低剂量组最高，与对照差异显著；GRA随剂量的提高有增加的趋势，且中剂量组与对照达显著水平；雄性SD大白鼠的MID随着剂量的增加而升高，中、低剂量组与对照比较差异极显著，为炎症反应的表现．高剂量处理组由于SD大白鼠全部中毒死亡，故无法检测血液学指标．表330 d喂养守宫木对SD大白鼠血液学指标的影响Tab．3Effects of30 d feeding withSauropus androgynus on haematologyical indices ofSD white rat1)高剂量处理的雌雄大白鼠全部死亡，故没有血液学指标血液生化检查结果见表4．雌雄性SD大白鼠的TP、ALB低于对照，且雌性大鼠中剂量组与对照之间差异极显著；雌雄性SD大白鼠的中剂量处理组的AST均大于对照，且雄性大白鼠的AST、ALP的低剂量处理均显著大于对照；说明守宫木喂养对大鼠的肝、肾有影响．高剂量处理组由于sD大白鼠死亡，无法检测血液生化指标．2．3．430 d喂养对SD大白鼠器官系数的影响30 d喂养对SD大白鼠器官系数的影响如表5所示．雌性大鼠的肝体比、肾体比、肺体比随剂量的增加而升高，中剂量组与对照差异极显著．高剂量组由于试验过程大鼠中途中毒死亡而没有测定器官系数，故无法比较．而雄性大鼠肾脏的器官系数有增高趋势，中剂量组与对照差异极显著，但雄性大鼠的肝、肺未见有规律变化．0OOO0O巧加”∞5 s／一言。。世一E第4期郭巨先等：华南野生蔬菜守宫木的毒理学研究131)高剂量处理的雌雄大白鼠全部死亡，故没有血液生化学指标表530 d喂养守宫木对SD大白鼠器官系数的影响Tab．5Effect of30 d feeding withSauropus androgynus on organ coefficient ofSD white rat％1)高剂量处理的雌雄大白鼠全部死亡，故没有器官系数指标2．3．5病理组织学检查病理组织学检查表明：低剂量组和中剂量组与正常对照组之间，除睾丸组织病变外，其他组织在组间差异不显著；高剂量处理组检测器官病变较明显，与其他剂量组比较差异显著，其中肝、肾显示中毒性病变．守宫木引起睾丸病变，于低剂量组开始出现，中剂量组较明显，高剂量组中病变最明显，且病变具有特异性变化．高剂量处理组病理组织学检查结果表明：肝病变有特征性，肝细胞弥漫性坏死，核固缩、碎裂和核缺乏，有代谢性中毒特征变化；肾小球肿胀，肾细管上皮细胞广泛坏死，细胞核固缩和消失，是中毒性肾病，具有特异性变化；脾脏瘀血，动脉瘀血、肿胀、闭合；心肌问水肿，心肌变性，有肌溶现象，是明显的心衰，无炎性细胞，属中毒性病变；肺部很严重的瘀血，间质出血，散发性细胞坏死，表现为休克肺，且雌雄性大鼠的个体问差异明显；睾丸曲精管之间形成明显水肿，低倍镜镜检管腔细胞排列紊乱，高倍显示一条曲精管，各层生精细胞核染色质较致密，具有核的分裂，表现为曲精管上皮细胞异常分裂，曲精细管的管腔中出现大量异常的多倍体细胞；肠绒毛上皮变性脱落，有自溶现象．试验中发现肺的损伤，具有雌雄间差异，其他器官病变雌雄间差异不显著．3讨论急性试验结果表明守宫木的急性毒性试验的小鼠经口灌LD卯大于lO．00 g·kg～，未出现异常及死亡现象，根据国家标准《食品安全毒理学评价程序——急性毒性试验》H1的急性毒性剂量分级标准确定为急性实际无毒级．小鼠精子畸形试验结果表明，守宫木对小鼠的精子畸形率有显著影响，试验结果呈阳性．30 d喂养SD大白鼠试验结果显示，守宫木在一定的剂量下出现了明显的毒性作用：症状表现为精神沉郁、运动失调、打堆伏卧、呼吸急促、全身震颤、反应迟钝、极度消瘦、动物陆续死亡，组问差异显著．动物体质量呈下降趋势，体质量增长率和饲料利用率低．血液学指标测定结果表明：雄性sD大白鼠的MID有升高倾向，中、低剂量组与对照比较差异极显著，呈一定的剂量反应关系，为炎症反应的表现．血液生化学统计结果表明：雌、雄性SD大白鼠的TP和